pcr技术一定要90度吗?

PCR技术并不一定要90度，这个温度主要取决于DNA聚合酶的种类。普通Taq酶常用94度变性，但新型酶如Q5可在98度工作。低温酶如Pfu适合72度以下环境。实验时需根据酶说明书调整温度梯度，比如95度变性、55度退火、72度延伸是常见组合。温度过高会破坏酶活性，过低则影响扩增效率。

PCR温度选择依据

温度设置直接影响实验成败。变性温度不足会导致DNA解链不完全，退火温度过高会错过引物结合位点。不同模板需要不同条件，GC含量高的片段需提高变性温度。优化实验时需测试多个温度点，比如92度到98度之间比较效果。实验室常用梯度PCR仪自动筛选最佳温度。