pcr退火温度哪个高?

PCR退火温度高低取决于引物长度和GC含量。引物越长、GC比例越高，退火温度就越高。比如20个碱基的引物比15个碱基的退火温度高5到10度。GC含量60%的引物比40%的退火温度高3到8度。实验时需要根据引物序列计算最适温度，过高会导致扩增失败，过低则出现非特异性产物。

退火温度的影响

退火温度直接影响PCR扩增效果。温度过高时，引物与模板结合不充分，产物量少；温度过低时，引物可能错误结合，产生杂带。实际操作中，常用梯度PCR测试不同温度，选择条带最清晰、背景最干净的设置。一般退火温度比引物熔解温度低5度左右效果最佳。