离子交换色谱柱和反相色谱柱有什么区别?

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离子交换色谱柱和反相色谱柱是两种常用的色谱分离技术。离子交换色谱柱主要基于电荷差异分离带电分子,适用于蛋白质、核酸等;反相色谱柱则利用疏水作用分离非极性或弱极性化合物,常用于小分子药物和多肽的纯化。两者分离机制、适用样品和流动相组成均有明显不同。

区别

离子交换色谱柱:通过固定相上的带电基团与样品分子的离子相互作用实现分离。阳离子交换柱带负电荷,吸附带正电的分子;阴离子交换柱则相反。流动相常含盐浓度梯度,改变离子强度洗脱目标物。适用于分离带电大分子,如蛋白质、氨基酸,分辨率高,但操作较复杂,需控制pH值。

反相色谱柱:固定相为非极性材料(如C18),样品分子因疏水作用吸附在柱上,通过流动相中有机溶剂比例增加逐步洗脱。适用于分离非极性小分子,如药物、脂溶性维生素,分析速度快,重复性好。但强极性分子保留弱,需添加离子对试剂改善分离效果。

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