时间:01-17人气:10作者:冥王啻非天
pcr扩增需要三个关键温度:变性温度、退火温度和延伸温度。变性温度一般在90到95摄氏度,使双链dna解开成单链。退火温度在50到65摄氏度之间,让引物结合到目标序列上。延伸温度约70到72摄氏度,dna聚合酶合成新的dna链。整个过程通过多次循环完成,每次循环都复制目标dna片段。
温度控制的重要性
温度控制直接影响pcr扩增效果。温度过高会导致酶失活,温度过低则影响结合效率。不同实验需要调整温度参数,比如扩增短片段可提高延伸温度,复杂模板需优化退火温度。仪器必须精确控温,偏差超过1摄氏度就可能失败。实验中常用热盖防止蒸发,确保温度稳定。
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